Sham va sovun ishlab chiqarish uchun sof Saposhnikovia divaricata moyi ulgurji diffuzerli efir moyi qamish diffuzerlari uchun yangi

Sham va sovun tayyorlash uchun sof Saposhnikovia divaricata moyi ulgurji diffuzerli efir moyi qamishli diffuzerlar uchun yangi. Tavsiya etilgan rasm

qisqacha tavsif:

2.1. SDE tayyorlash

SD ildizpoyalari Hanherb Co. (Guri, Koreya) dan quritilgan o't sifatida sotib olingan. O'simlik materiallari Koreya Sharq tabobati instituti (KIOM) doktori Go-Ya Choi tomonidan taksonomik jihatdan tasdiqlangan. Vaucher namunasi (2014 yil SDE-6) Koreya standart o'simlik resurslari gerbariyida saqlangan. SD (320 g) ning quritilgan rizomlari ikki marta 70% etanol bilan (2 soatlik reflyuks bilan) ekstraksiya qilindi va ekstrakt pasaytirilgan bosim ostida konsentratsiya qilindi. Qaynatma filtrlanadi, liofilizatsiya qilinadi va 4 ° C da saqlanadi. Xom boshlang'ich materiallardan quritilgan ekstraktning hosildorligi 48,13% (w/w) ni tashkil etdi.

2.2. Miqdoriy yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi (HPLC) tahlili

Xromatografik tahlil HPLC tizimi (Waters Co., Milford, MA, AQSh) va fotodiodli massiv detektori bilan amalga oshirildi. SDE ning HPLC tahlili uchun primer-O-glyukosylcimifugin standarti Koreya an'anaviy tibbiyot sanoatini targ'ib qilish institutidan (Gyonsan, Koreya) sotib olingan vasek-O-glyukosilhamaudol va 4'-O-β-D-glyukozil-5-O-metilvisamminol laboratoriyamizda ajratilgan va spektral tahlillar, birinchi navbatda NMR va MS tomonidan aniqlangan.

SDE namunalari (0,1 mg) 70% etanolda (10 ml) eritildi. Xromatografik ajratish XSelect HSS T3 C18 ustuni (4,6 × 250 mm, 5) bilan amalga oshirildi.μm, Waters Co., Milford, MA, AQSh). Mobil faza 1,0 ml/min oqim tezligida asetonitril (A) va suvdagi (B) 0,1% sirka kislotasidan iborat edi. Ko'p bosqichli gradient dasturi quyidagicha ishlatilgan: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) va 20–65% A (23–40 min). ). Aniqlash to'lqin uzunligi 210-400 nm da skanerdan o'tkazildi va 254 nm da qayd etildi. In'ektsiya hajmi 10,0 ni tashkil etdiμL. Uchta xromonni aniqlash uchun standart eritmalar yakuniy konsentratsiyada 7,781 mg/ml (prim-O-glyukosilsimifugin), 31,125 mg/ml (4'-O-β-D-glyukozil-5-O-metilvisamminol) va 31,125 mg/ml (sek-O-glyukosilhamaudol) metanolda va 4°C da saqlanadi.

2.3. Yallig'lanishga qarshi faollikni baholashIn Vitro

2.3.1. Hujayra madaniyati va namuna bilan ishlov berish

RAW 264,7 xujayralari American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, AQSh) dan olingan va 1% antibiotiklar va 5,5% FBS o'z ichiga olgan DMEM muhitida etishtirilgan. Hujayralar 37 ° C da 5% CO2 namlangan atmosferada inkubatsiya qilindi. Hujayralarni rag'batlantirish uchun vosita yangi DMEM muhiti va lipopolisakkarid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Sent-Luis, MO, AQSh) bilan almashtirildi.μSDE bor yoki yo'qligida g / ml qo'shilgan (200 yoki 400μg/ml) qo'shimcha 24 soat davomida.

2.3.2. Azot oksidi (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), o'simta nekrozi faktorini aniqlashα(TNF-α), va Interleykin-6 (IL-6) ishlab chiqarish

Hujayralar SDE bilan ishlov berildi va 24 soat davomida LPS bilan rag'batlantirildi. NO ishlab chiqarish oldingi tadqiqotga ko'ra Griess reagenti yordamida nitritni o'lchash yo'li bilan tahlil qilingan [12]. Yallig'lanish sitokinlarining sekretsiyasi PGE2, TNF-α, va IL-6 ishlab chiqaruvchi ko'rsatmalariga muvofiq ELISA to'plami (Ar-ge tizimlari) yordamida aniqlandi. SDE ning NO va sitokin ishlab chiqarishga ta'siri Wallac EnVision yordamida 540 nm yoki 450 nm da aniqlangan.™mikroplata o'quvchi (PerkinElmer).

2.4. Antiosteoartrit faoliyatini baholashIn Vivo

2.4.1. Hayvonlar

Erkak Sprague-Dawley kalamushlari (7 haftalik) Samtako Inc. (Osan, Koreya) dan sotib olindi va 12 soatlik yorug'lik/qorong'u tsikl bilan boshqariladigan sharoitlarda saqlangan.°C va% namlik. Kalamushlar laboratoriya dietasi va suv bilan ta'minlanganad libitum. Barcha eksperimental protseduralar Milliy Sog'liqni saqlash instituti (NIH) ko'rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi va Daejon universiteti (Daejon, Koreya Respublikasi) Hayvonlarni parvarish qilish va foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlangan.

2.4.2. Kalamushlarda MIA bilan OA ning induksiyasi

Hayvonlar randomizatsiyalangan va tadqiqot boshlanishidan oldin davolash guruhlariga tayinlangan (har bir guruh uchun). MIA eritmasi (3 mg/50μL 0,9% fiziologik eritma) ketamin va ksilazin aralashmasi bilan induktsiya qilingan behushlik ostida to'g'ridan-to'g'ri o'ng tizzaning intraartikulyar bo'shlig'iga yuborildi. Kalamushlar tasodifiy ravishda to'rt guruhga bo'lingan: (1) MIA in'ektsiyasi bo'lmagan sho'rlangan guruh, (2) MIA in'ektsiyasi bo'lgan MIA guruhi, (3) SDE bilan davolash qilingan guruh (200 mg / kg) MIA in'ektsiyasi va (4) ) MIA in'ektsiyasi bilan indometazin (IM-) bilan davolash qilingan guruh (2 mg / kg). Kalamushlar 4 hafta davomida MIA in'ektsiyasidan 1 hafta oldin SDE va IM bilan og'iz orqali yuborilgan. Ushbu tadqiqotda qo'llanilgan SDE va IM dozalari avvalgi tadqiqotlarda qo'llanilganlarga asoslangan edi [10,13,14].

2.4.3. Orqa panjaning og'irlikni taqsimlash o'lchovlari

OA induksiyasidan so'ng, orqa oyoqlarning og'irlik ko'tarish qobiliyatidagi dastlabki muvozanat buzilgan. Og'irlikni ko'tarish tolerantligidagi o'zgarishlarni baholash uchun ish qobiliyatini sinovdan o'tkazuvchi (Linton instrumentation, Norfolk, Buyuk Britaniya) ishlatilgan. Kalamushlar ehtiyotkorlik bilan o'lchash kamerasiga joylashtirildi. Orqa oyoq-qo'lning yuk ko'taruvchi kuchi 3 soniya davomida o'rtacha hisoblangan. Og'irlikni taqsimlash nisbati quyidagi tenglama bilan hisoblangan: [o'ng orqa oyoqdagi vazn/(o'ng orqa oyoqdagi vazn + chap orqa oyoqdagi og'irlik)] × 100 [15].

2.4.4. Sarum sitokin darajasini o'lchash

Qon namunalari 4 ° C da 10 daqiqa davomida 1500 g da santrifüj qilindi; keyin sarum to'plangan va ishlatilgunga qadar -70 ° C da saqlanadi. IL-1 darajasiβ, IL-6, TNF-α, va sarumdagi PGE2 ishlab chiqaruvchi ko'rsatmalariga muvofiq R&D Systems (Minneapolis, MN, AQSh) kompaniyasining ELISA to'plamlari yordamida o'lchandi.

2.4.5. Haqiqiy vaqtda miqdoriy RT-PCR tahlili

Umumiy RNK tizza bo'g'imlari to'qimalaridan TRI reagent® (Sigma-Aldrich, Sent-Luis, MO, AQSh) yordamida ekstraksiya qilindi, cDNKga teskari transkripsiya qilindi va SYBR yashil (Applied Biosystems) bilan TM One Step RT PCR to'plami yordamida PCR kuchaytirildi. , Grand Island, NY, AQSH). Real vaqt rejimida miqdoriy PCR Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR tizimi (Applied Biosystems, Grand Island, NY, AQSH) yordamida amalga oshirildi. Primer ketma-ketligi va prob ketma-ketligi Jadvalda ko'rsatilgan1. Namuna cDNAlarining alikvotlari va teng miqdordagi GAPDH cDNKlari ishlab chiqaruvchi ko'rsatmalariga muvofiq (Applied Biosystems, Foster, CA, AQSH) DNK polimerazasini o'z ichiga olgan TaqMan® Universal PCR master aralashmasi bilan kuchaytirildi. PCR shartlari 40 tsikl uchun 50 ° C da 2 minut, 94 ° C da 10 minut, 95 ° C da 15 soniya va 60 ° C da 1 minut. Maqsadli gen kontsentratsiyasi ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq qiyosiy Ct (kuchaytirish uchastkasi va pol o'rtasidagi o'zaro faoliyat nuqtadagi pol sikl soni) usuli yordamida aniqlandi.

FOB narxi:0,5 - 9 999 AQSH dollari / Dona

Minimal buyurtma miqdori:100 dona / dona

Ta'minot qobiliyati:Oyiga 10000 dona / dona

Bizga elektron pochta xabarini yuboring

Mahsulot detali

Mahsulot teglari

Osteoartrit (OA) eng tez-tez uchraydigan tayanch-harakat tizimi kasalligi va keksa odamlarda eng keng tarqalgan degenerativ qo'shma kasallikdir.1]. OA qisman shikastlanish, xaftaga tuzilishi va funktsiyasini yo'qotish, yallig'lanishga qarshi va yallig'lanishga qarshi yo'llarning disregulyatsiyasi natijasida yuzaga keladigan holat.2,3]. Bu, birinchi navbatda, sinovial bo'g'imlarning artikulyar xaftaga va subxondral suyagiga ta'sir qiladi va bo'g'imlarning etishmovchiligiga olib keladi, bu esa og'irlikni ko'tarish, shu jumladan yurish va tik turganda og'riqlarga olib keladi.4].

OA ni davolab bo'lmaydi, chunki xaftaga vayron bo'lgandan keyin uni qayta tiklash juda qiyin [5]. Davolashning maqsadlari og'riqni yo'qotish, bo'g'imlarning harakatchanligini saqlash yoki yaxshilash, bo'g'imlarning kuchini oshirish va kasallikning nogironlik ta'sirini kamaytirishdir. OA ni farmakologik davolash usullari bemorning qo'shma funktsiyasini va hayot sifatini oshirish uchun og'riqni kamaytirishga qaratilgan. Xaftaga tushishi OAdagi asosiy hodisa bo'lsa-da, kollagenning degradatsiyasi yallig'lanish bilan bog'liq holda OA ning qaytarilmas rivojlanishini belgilaydigan asosiy hodisadir.6,7]. Yallig'lanishga qarshi va xondroprotektiv faollik bilan davolash OA bilan og'rigan bemorlarda og'riqni engillashtiradi va matritsaning yaxlitligini saqlab qoladi.

Shuning uchun yallig'lanishni kamaytirish OA davolashda foydali bo'lishi mumkin. Oxirgi tadqiqotlar o'simlik manbalarining OA rivojlanishida himoya rolini taklif qiladi, xondrositlarning yallig'lanishini yumshatish va xaftaga tushishini, ularning bo'g'imlar bilan bog'langan to'qimalar bilan o'zaro ta'sir qilish qobiliyati orqali, natijada qo'shma og'riqni kamaytiradi.8].

ning ildiziSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) an'anaviy tibbiyotda Koreya va Xitoyda bosh og'rig'i, og'riq, yallig'lanish va artritni davolash uchun keng qo'llaniladi.9,10]. Turli xil farmakologik ta'sirlarSaposhnikovia divaricata(SD) shuningdek, yallig'lanishga qarshi, og'riq qoldiruvchi, antipiretik va antiartritik xususiyatlarni o'z ichiga oladi.9,11]. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqot shuni ko'rsatdiki, SD xromon ekstrakti kollagen bilan qo'zg'atilgan artritning sichqoncha modelida potentsial antirevmatoid artrit ta'siriga ega.10]; ammo, yallig'lanishga qarshi va antiartrit faolligini qo'llab-quvvatlash uchun bir nechta tadqiqotlar o'tkazildiSaposhnikovia divaricataekstrakti (SDE).

Shu sababli, ushbu tadqiqot SD ning 70% etanol ekstraktining yallig'lanishga qarshi va antiosteoartrit faoliyatini o'rganib chiqdi. Birinchidan, SDE ning yallig'lanishga qarshi ta'siri baholandiin vitroLPS-induktsiyali RAW 264,7 hujayralarida. Keyinchalik, SDE ning antiosteoartrit ta'siri og'irlik taqsimotini, artikulyar xaftaga degradatsiyasini va mononatriy yodoatsetat (MIA-) bilan qo'zg'atilgan OA ning kalamush modelida yallig'lanish reaktsiyalarini baholash orqali o'lchandi.